外泌体提取试剂盒
外泌体（exosomes）是一种能被机体内大多数细胞分泌的直径大约为 30 ~ 150 nm 的具有脂质双层膜的微小膜泡。它广泛存在并分布于各种体液中，携带和传递重要的信号分子，形成了一种全新的细胞间信息传递系统，影响细胞的生理状态并与多种疾病的发生与进程密切相关。
华美生物外泌体提取试剂盒提供了一种简单可靠的方法可从细胞培养上清液，血清，血浆，乳液，尿液，唾液、酵母、植物中提取完整的外泌体。本产品提取的外泌体囊泡适用于下游的电镜分析、NTA分析、纳米流式（NanoFCM）分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。
方法对比
研究外泌体内涵成分的前提是对其进行高质量的提取，由于外泌体粒径较小且与多种其他生物分子混合在一起，导致其分离纯化困难，阻碍了对其的进一步研究。
近年来，研究人员根据外泌体理化性质研发了多种分离纯化方法：常用的有超速离心法、密度梯度超速离心法、超滤法、多聚物沉淀法（PEG）、免疫磁珠法、试剂盒分离法等。
而对于外泌体的分离，首先要关注外泌体的提取质量，包括纯度、囊泡状态、得率及重复性等方面的评估，然后才是技术路线的选择。
| 纯化方法 |
外囊泡纯度 |
囊泡状态 |
可操作性 |
回收量 |
重复性 |
设备要求 |
| 超速离心法 |
★★ |
★★ |
★★★ |
★★ |
★ |
超速离心机 |
| 密度梯度离心法 |
★★★★ |
★★ |
★ |
★ |
★ |
超速离心机 |
| 超滤法 |
★★ |
★★★ |
★★★ |
★★ |
★★ |
普通离心机 |
| 多聚物沉淀法 |
★ |
★★ |
★★★★ |
★★★★ |
★★ |
普通离心机 |
抗体亲和纯化
（磁珠） |
★★★ |
★ |
★★★ |
★★ |
★★★★ |
普通离心机+磁铁架 |
华美生物
外泌体纯化法 |
★★★ |
★★★ |
★★★ |
★★★ |
★★★★ |
普通离心机
(配套浓缩管) |
1. 超速离心法是最常用的外泌体纯化手段，目前已发表文献引用最多的方法，采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。
优点：无需特殊试剂，操作简便，适合大批量样本。
缺点：耗时耗力，纯度相对较低，回收率不稳定，重复离心会一定程度损伤外泌体，设备要求高。
2. 密度梯度超速离心法是在超速离心力作用下，使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层，是一种区带分离法。通过密度梯度离心，样品中的外泌体将在1.13-1.19g/mL的密度范围富集。
优点：纯度相对较高，适合大批量样本。
缺点：步骤繁琐，耗时，回收率不稳定，重复离心会一定程度损伤外泌体，设备要求高。
3. 超滤法是将溶剂及小分子物质过滤到膜的另一侧，而将相对大分子物质截留在超滤膜上，以达到分离的目的。
优点：简单高效，不影响外泌体的完整性。
缺点：外泌体可能会阻塞过滤孔，导致膜的寿命减短，分离效率和纯度较低。此外，截留在膜上的外泌体间也会发生粘附，导致产量降低。
4. 多聚物沉淀法根据化合物与外泌体的理化特性，利用共沉淀或者反向筛选的方式对外泌体进行分离纯化。
优点：操作简单、耗时短、无设备限制。
缺点：纯度较低，存在假阳性（杂蛋白较多或一些难以去除的聚合物），机械力或化学添加物对外泌体产生破坏，存在于分离物中的聚合物也可能会干扰下游分析等。
5. 抗体亲和（磁珠）法利用包被单克隆抗体的磁珠结合外泌体，外泌体表面有其特异性标记物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。
优点：纯度较高，特异性和重复性好、操作简便、无设备限制。
缺点：效率和回收率较低，仅能捕获表达特定抗原的目标外泌体，外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响，囊泡完整性影响较大。
综上所述，现有技术的方法提取到的外泌体，缺陷在于：收率较低，耗时长、纯度不高，外泌体囊泡不完整等。
鉴于上述问题，武汉华美生物工程有限公司匠心研发的外泌体提取试剂盒通过蛋白亲和的方式分离外泌体，无需超速离心即可实现高效率地从各种类型样本中提取高纯度、囊泡结构完整的外泌体，具有简便、稳定、易操作的优点。
产品优势
● 适用于各种样品类型
CUSABIO外泌体提取试剂盒提供了一种简单可靠的方法，可从细胞培养上清液，血清，血浆，乳液，尿液，唾液、酵母、植物中提取完整的外泌体。
- Exosomes extracted from plasma
- Exosomes extracted from serum
- Exosomes extracted from urine
- Exosomes extracted from Hela cells
- Exosomes extracted from Breast Milk
- Exosomes extracted from saliva
Exosomes extracted from Hela cells
Exosomes extracted from serum
Exosomes extracted from plasma
Exosomes extracted from Breast Milk
Exosomes extracted from saliva
Exosomes extracted from urine
Exosomes extracted from pichia pastoris
Exosomes extracted from kluyveromyces lactis
● 适用于各种细胞上清液中外泌体的分离提取
CUSABIO外泌体提取试剂盒可用于从各种细胞的上清液中分离外泌体，例如A375, Hela, HEPG2, MG63, Ntera-2, PC-3, Raji, U87, U251等。
- Exosomes extracted from A375 cells,
- A375 cell Lysate
- Exosomes extracted from HEPG2 cells
- Exosomes extracted from PC-3 cells
- Exosomes extracted from Hela cells
- Exosomes extracted from U87 cells
- Hela cell Lysate
- Exosomes extracted from MG63 cells
- Exosomes extracted from Ntera-2 cells
- MG63 cell Lysate
- Exosomes extracted from Raji cells
- Exosomes extracted from U251 cells
- Raji cell Lysate
- Exosomes extracted from Hela cells
- Exosomes extracted from Hela cells
- Exosomes extracted from urine
● 所提取的外泌体囊泡结构完整，呈球形或碟形，颗粒均匀
Exosomes extracted from Breast Milk
Exosomes extracted from urine
Exosomes extracted from saliva
Exosomes extracted from pichia pastoris
● 高产量，单次提取，可获得3*10^11个外泌体囊泡
CUSABIO (CSB-EI0102, CSB-EI0110)
粒径大小：79.19 nm
颗粒浓度： 3.08*1011 个 /mL
● 通过对比，华美试剂盒所提取的外泌体整体优于其他三家知名品牌试剂盒，可与超速离心法相媲美
- CSB-EI0102(2T), CSB-EI0110(10T)
- Company A
- Company B
- Company C
- Ultracentrifugation
- Hela Cell Lysate
产品列表
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客户评价
实验应用：提取尿液EV，并检测所含RNA,主要是miRNA
样品信息：晨尿，随机尿
产品评价：尿液所含的细胞外囊泡（EV）可能包含了膀胱癌细胞主动分泌的miRNA,通过检测EV中特定miRNA峰度的变化，可能识别早期癌症。Cusabio外泌体提取试剂盒分离尿液中的EV；一部分EV提取RNA、反转录、qPCR检测内参靶标；另一部分EV简单处理后直接反转录、qPCR检测。CUSABIO试剂盒提取结果不错。
实验应用：qPCR
样品信息：细胞上清
产品评价：提取外泌体效果还不错！
实验应用：TEM
样品信息：细胞上清液-浓缩5倍-500微升-400ul洗脱-又超滤浓缩至20ul
产品评价：能清楚看到外泌体，完整、清晰，但是由于不清楚1T可以提取最多50ml细胞上清这件事，导致使用太少细胞上清液，提取的外泌体太少。
实验应用：WB
样品信息：脑组织
产品评价：所提取外泌体进行了WB检测标志蛋白CD9，电镜未做，但内参蛋白发光时未见，原因未知。但在提取过程时确实非常方便，不需要超速离心。值得推荐~
实验应用：WB
样品信息：细胞上清
产品评价：提取到目标蛋白分子，WB条带也比较清晰~
实验应用：qPCR
样品信息：细胞上清
产品评价：提取外泌体效果还不错！
实验应用：WB
样品信息：胰腺癌细胞上清外泌体提取
产品评价：所提取外泌体较为纯正，步骤简单，实验结果可靠。目前就是从提取的外泌体里面发现有我的目标分子。
实验应用：qRT-PCR验证lncRNA的存在及表达
样品信息：25ml MHCC97H肝癌细胞的培养基上清
产品评价：结果所示为 试剂盒所提取外泌体的lncRNA扩增曲线以及扩增的CT值。
总体来说，提取外泌体总共需要花费时间并不多，过程较为简单，只是有一处稍有疑惑。浓缩的0.75ml的上清在进行0.45um膜进行过滤时，量太少不太好进行过滤，我是往里打空气，但总会有损失。这一步骤不过滤可否。
贵公司试剂盒regentA为乳状物，上层为上清，很难混匀，吸取的时候乳状液较难吸上。望这一步骤说明进行解释说明。
实验应用：WB/电镜
样品信息：血清，1mL
产品评价：WB条带特异，电镜结果显示结构完成，有典型的外泌体形状呈现，结果比预期好不少！值得推荐~
实验应用：电镜/NTA
样品信息：中段晨尿，15ml
产品评价：所提取的外泌体结构完成，呈典型的茶托装，平均粒径69nm，浓度达到10^10 Particles/mL以上，结果良好
常见问题
1、如何保存纯化获得的外泌体囊泡？
答：短时间内保存于4℃，长时间保存需要放置于-80℃（建议分装后保存、避免反复冻融）
2、如何获得无外泌体血清培养细胞？
答：a、将细胞培养用的血清通过超速离心10h以去除血清中外泌体（无菌操作）；
b、可选择无血清培养基进行细胞培养；
c、可选择去外泌体血清进行细胞培养。
3、如何确认所提取到的是外泌体？
答：可以通过特定标志物的WB验证，电镜、粒径（纳米流式、NTA）等方式来确认。
4、与超速离心相比，我们的优点是什么？
答：与超速离心相比，可以简便的、稳定的、高重复性的实现外泌体的回收，且没有仪器设备的限制。
研究发展
外泌体爆炸性研究活动已经慢慢演变为分子医学的快速发展。外泌体在临床医学中有十分光明的应用前景，主要是因为它们含有丰富的生物标志物，可用于监测临床状态、诊断疾病、治疗反应、疾病进展等。重要且有影响力外泌体研究领域会随着高效率的外泌体分离技术的发展而发展。
外泌体可作为生物标志物用于疾病的诊断，也推动了以外泌体为靶标的治疗方法研究或将外泌体本身用作治疗工具的研究。将外泌体用作治疗工具的临床研究正在开展之中，其目的是研究患者自身MSC分泌外泌体或健康捐赠者体内外泌体用于治疗的安全性和有效性。这个趋势下，外泌体用作药物输送系统作为基因治疗的潜在载体有可能变得更加普遍。外泌体在癌症中同时发挥免疫激活和免疫抑制功能，外泌体肿瘤免疫疗法有望诞生抗癌疫苗。
外泌体作为疾病诊断标志物的潜在应用依赖于基于外泌体的药物递送系统的技术突破，理论上能够从外泌体中检测到DNA序列变异、RNA的表达变化、蛋白质变化等。要将其用于临床治疗，外泌体的大规模工业化生产还面临很大的挑战。首先，对外泌体的具体合成机制、功能了解并不是非常详细。其次，存在外泌体分离技术、分离量、及检测技术的挑战，外泌体在肿瘤学中的应用还需要加强和深入研究。然而，虽然当前外泌体生物学仍然不成熟，但越来越多的兴趣和资金投入必将加速外泌体基础研究进展和临床转化。
